间充质干细胞成骨诱导分化试剂盒

货号：BVYDPY019

规格： 100ml    200ml

详情描述：

产品描述

本产品为团队精心优化的间充质干细胞成骨诱导分化试剂盒，可增强间充质干细胞向成骨细胞分化的能力。

本产品仅用于科研用途，不可用于诊断、治疗、临床、家庭及其他用途。

产品组成成分及保存

注意：1.为保证产品的有效性，请避免反复冻融。

2. 配制好的诱导培养基保存于2-8℃，有效期为2周，请根据实验用量合理配制。

产品使用说明

1. 间充质干细胞成骨诱导分化完全培养基的配制

① 室温条件下融化添加剂及血清。（注意：若添加剂或血清中有沉淀物，属正常现象，无须过滤，避免成分丢失。）

② 根据实验用量，于无菌操作台中配制完全培养基，建议每次配制50mL，先加细胞基础培养基和胎牛血清，再加诱导分化添加剂。（配制比例见表一）

表一

2. 间充质干细胞成骨诱导分化实验步骤

①包被细胞培养瓶/板：向细胞培养器皿中加入0.1%明胶溶液，轻微晃动，使包被液完全覆盖培养器皿底面，置于37℃培养箱中孵育30min，吸除液体即可使用。

②建议取第3~5代、纯度达90%以上、状态良好的间充质干细胞，将其消化收集，使用含10%FBS的完全培养基调整细胞浓度，均匀铺于包被好的培养瓶/板中，置于37℃，5%CO2，饱和湿度的培养箱中培养。（细胞接种详情参考表二）

表二

③待细胞汇合度达约90%时，即可进行诱导分化。

④小心吸弃细胞培养上清，沿孔壁缓慢加入提前配制好的诱导分化完全培养基，置于37℃恒温细胞培养箱中培养。

（注意：完全培养基加入细胞前需提前置于37℃预热。）

⑤每2~3day换用新鲜的诱导分化完全培养基。换液时，若细胞培养上清颜色变为澄清的黄色，是由于细胞量较大，营养消耗较快导致的，请及时缩短换液周期。

⑥细胞诱导2~4周后，即可进行茜素红染色鉴定。（注意：请在显微镜下确认钙结节形成后，再进行染色鉴定。）

3. 茜素红染色分析

① 细胞诱导分化结束后，小心吸弃细胞培养上清，1×PBS润洗1~2次，室温固定30 min。（细胞固定液为4%中性甲醛溶液等，体积参考表二）

② 吸弃细胞固定液，1×PBS润洗2次。沿孔壁缓慢加入茜素红染色液，染液体积请参考表二，室温染色30min。（注意：染色液底部可能会有沉淀，吸取时尽量不要触及底部。若细胞染色后有沉淀，1×PBS洗去即可。）

③ 吸出染色液，1×PBS润洗，去掉浮色。显微镜下观察细胞染色效果，钙盐呈较深的橙红色。（注意：染色液可重复使用，建议收集。）

质量控制

    无菌检测（细菌、真菌和支原体检测）

    pH测试

    渗透压检测

    内毒素

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注意事项：

仅限科研用。培养体系中的一些组分是对人体健康有害的物质，请不要用暴露的皮肤接触培养体系的液体和有培养体系的液体残留的容器内部；这部分有害物质的浓度和危害性都较低，如有接触，立即用自来水冲洗即可。