试剂
产品编号：BV23001
产品规格：10 次（10cm皿）
产品概述：
远见生物的慢病毒包装试剂盒可以兼容大多数慢病毒表达载体，包装质粒配比经过优化，更低毒性的转染试剂，操作更为安全简单，能够快速高效的收获慢病毒。
试剂盒组成
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试剂盒成分 |
货号 |
规格 |
运输温度 |
保存条件 |
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混合包装质粒 |
BV23001A-1 |
400ul(0.5ug/ul) |
4℃运输 |
-20℃ |
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eGFP阳性对照质粒 |
BV23001A-2 |
40ul(0.25ug/ul) |
4℃运输 |
-20℃ |
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转染试剂 |
BV23001A-3 |
100ul |
4℃运输 |
-20℃ |
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转染试剂buffer |
BV23001A-4 |
5ml |
4℃运输 |
-20℃ |
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增强剂 |
BV23001A-5 |
400ul(10mg/ml) |
4℃运输 |
-20℃ |
实验所需其他实验材料：
1.293T细胞2.DMEM培养基
3.胎牛血清
4.低内毒素慢病毒质粒
慢病毒包装步骤：
1. 转染前，传代 293T 细胞至 10cm培养皿中，当细胞密度达到80-90%即可转染。2. 转染前1-3小时，更换10ml 新鲜的完全培养基。
3. 转染，配置转染复合物：
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A管（质粒） |
B管（转染试剂） |
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慢病毒质粒 |
10ug |
转染试剂 |
5ul |
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混合包装质粒 |
20ul |
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转染试剂buffer |
250ul |
转染试剂buffer |
250ul |
4. 转染后48-72小时，收取细胞培养液，以2000g离心10分钟或者用0.45um的PES滤器过滤得到慢病毒粗提液。慢病毒粗提液可以直接使用，或者通过BV23001A 慢病毒浓缩试剂进行浓缩。
1) 质粒稀释：取10ug慢病毒质粒，20ul混合包装质粒，用250ul配套Buffer溶液稀释，并轻轻混匀5s。2) 试剂稀释：使用250ul 配套 Buffer 溶液稀释5ul试剂，并轻轻混匀5s。3) 复合物配置：将稀释的试剂溶液加入到稀释的质粒溶液中并涡旋25秒左右，然后静置约25分钟，形成复合物纳米粒子（注意涡旋和孵育时间）。4) 将含复合物纳米粒子的溶液均匀加入到细胞培养皿中，轻微混匀，至于37℃，5%CO2培养箱中培养（无需24 小时更换培养基）。
5. 分装与保存，慢病毒在4℃可以稳定保存约3天，长期保存需分装后保存于-80℃。注意：一次冻融可能会使慢病毒滴度降低50%，尽量避免反复冻融。
