混合淋巴细胞培养试验检测试剂盒

背景介绍：

将两个遗传不同的个体的淋巴细胞在体外混合共同培养时，因其表面的组织相容性抗原不同而相互刺激，会导致对方淋巴细胞分裂增殖和转化，这种反应称为双向混合淋巴细胞培养（two way MLC）;若将其中一方的淋巴细胞预先处理使之细胞中DNA失去复制能力，但仍能刺激另一方淋巴细胞发生转化，称为单向混合淋巴细胞培养（one way MLC）。主要组织相容性复合体（MHC）和/或M位点基因编码的细胞表面抗原是这种反应的主要刺激物，反应细胞为T细胞。根据淋巴细胞反应的强度，可评价两者组织相容性抗原的差异程度以及淋巴细胞对同种异体细胞的反应能力。

产品简介：

1.本试剂盒适用于混合淋巴细胞共培养试验的检测，包括器官移植前的组织配型试验，免疫力低下患者的免疫功能检测，药物及移植物的免疫排斥作用检测，其他细胞或外界刺激物对于T淋巴细胞活化的影响检测，对影响T细胞活化能力的药物筛选，以及其他免疫调节试验研究等；

2.本试剂盒适用于不同物种混合淋巴细胞培养试验的检测，包括人、狗、猪、羊、鼠等；

3.本试剂盒可以用于100次实验。

包装清单：

保存条件：

P1和P2溶液可于-20℃保存1年，避免反复冻融。

注意事项：

1.使用前将P1和P2溶液分装保存，避免反复冻融；

2.实验操作结束请尽快进行流式检测，避免荧光损失；

3.为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套进行操作。

使用说明：

1.刺激细胞的制备：

1）刺激细胞是指与第二种淋巴细胞表面主要组织相容性复合体不同的细胞，可以为淋巴细胞或其他细胞，例如EB病毒转化的B淋巴母细胞（如N23细胞株，经过克隆化）、HTC细胞或PBMC细胞等。

a.当刺激细胞为异体淋巴细胞时：取供体新鲜外周静脉血，分离PBMC。台盼蓝染色，计数板计数。加入PBS，调整细胞密度为1~2×106/ml；

b.当刺激细胞为异体永生化细胞系时：以N23细胞为例，取处于对数生长期的N23细胞，离心后重悬于新鲜培养基中，台盼蓝染色，计数板计数。加入PBS，调整细胞密度为1~2×106/ml；

2）向上述细胞中加入5µl P1溶液，37℃水浴30 min；

3）PBS离心洗涤2次，留取沉淀，计数；

4）用含10%FBS的RPMI 1640液调整细胞密度为1×107/ml，标记为S。

2.第二种淋巴细胞的制备：

1）取受体新鲜外周静脉血，分离PBMC；

2）PBS洗两次，每次1500rpm离心10min。台盼蓝染色，计数板计数。

3）将上述细胞用含有5%FBS的1640培养基重悬，调整细胞浓度为1×107/ml。加入5µl的P2溶液，37℃避光水浴5min。然后利用预冷的含5%FBS的PBS洗涤2次。

4）用含有10%FBS的PRMI 1640重悬上述细胞，调整细胞密度为1×107/ml，标记为R。

3.混合淋巴细胞培养：

将上述已制备好的R和S按如下分组加入96孔板，置37℃，5%CO2的培养箱中培养3-5天。

实验组：R （50μl）+ S（50μl）；其中R与S的比例可根据不同实验要求进行调整；

对照组：R （50μl）；

每组3个复孔，空白对照组为RPMI 1640培养液100μL。

4.流式细胞术检测淋巴细胞的增殖情况:

通过流式细胞术，通过设门圈出淋巴细胞群，检测淋巴细胞的增殖情况。

结果以刺激指数（Stimulation indices, SI）表示，SI=实验组淋巴细胞增殖百分比-对照组淋巴细胞增殖百分比。